實驗條件的選擇

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

進口包裝：

檢測范圍和靈敏度不同。用量少時，可采用分裝。在早期，它的耐用性不是很好。

試劑盒標準曲線最高點OD值為2.0±0.2，零孔OD值控制在0.10以下。

試劑盒標準曲線相關系數R≥0.98。

試劑盒重現性好，板內及板間變異系數<9%。

試劑的成分均給予20%的余量，以確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能出現試劑不足的情況。

檢測抗體和酶聯物的稀釋度適當（均為1:30），方便檢測人員準確進行稀釋工作，保證檢測結果的重復性。

Interleukin-6 是一種細胞因子，已被鑒定為 B 細胞分化因子。它是一種抗體形成系統，其生理特性，如誘導肝細胞中的急性蛋白質合成和基于與白細胞介素3協同作用的生長刺激，也備受關注。并且已經證實白細胞介素6與病理學之間存在穩定的相關性。例如，有報道稱各種疾病的生長因子是白介素6，骨髓瘤細胞可以合成白介素6并表達白介素6受體。此外，白細胞介素6在多種炎癥性疾病和自身免疫性疾病中發揮重要作用。本試劑盒可高靈敏度檢測小鼠血清和細胞基質上清液中的白細胞介素6。原理 本試劑盒使用兩種特異性抗體，洗板后加入TMB底物溶液顯色，顯色強度與小鼠體內IL-6量成正比。檢測范圍 10.94 700 pg/mL 預期用途

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

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